Описание

Набор Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit – это комплексное решение для эффективного синтеза первой цепи кДНК из РНК-матриц. В основе набора лежит обратная транскриптаза RevertAid Reverse Transcriptase (RT), рекомбинантная M-MuLV RT, сохраняющая активность при 42–50°C и обеспечивающая синтез кДНК длиной до 13 kb. Ингибитор РНКазы RiboLock RNase Inhibitor, входящий в состав набора, надежно защищает РНК-матрицы от деградации при температурах до 55°C. Узнайте больше о том, как этот набор может оптимизировать ваши исследования в области молекулярной биологии.

Преимущества RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit

Синтез полноразмерной первой цепи кДНК длиной до 13 kb
Оптимальная температура реакции: 42°C
Полный комплект, включающий все необходимые компоненты для реакции обратной транскрипции
Время реакции: 60 минут

Набор поставляется с олиго(dT)18 и случайными гексамерными праймерами. Олиго(dT)18 праймер селективно связывается с поли(A)-хвостом мРНК. Случайные гексамерные праймеры не требуют наличия поли(A)-хвоста и могут использоваться для транскрипции 5'-концевых участков мРНК или синтеза кДНК РНК-специфичностей, не имеющих поли(A)-хвоста (например, микроРНК). С набором также могут использоваться ген-специфичные праймеры.

В первую цепь кДНК могут быть включены радиоактивно- и нерадиоактивно-меченые нуклеотиды для использования в качестве зонда в экспериментах по гибридизации, включая микрочипы. Интересно, что обратная транскриптаза M-MuLV, используемая в наборе, была впервые выделена из вируса лейкемии мышей Молони. Этот вирус, хотя и является ретровирусом, предоставил ученым ценный инструмент для изучения РНК и ДНК.

Применение RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit

Синтез первой цепи кДНК для RT-PCR и RT-qPCR
Создание библиотек полноразмерных кДНК
Синтез антисмысловой РНК
Для использования с RT-PCR

• RevertAid Обратная Транскриптаза • RiboLock Ингибитор РНКазы • 5X Реакционный Буфер • Смесь дНТФ • Олиго(dT)18 Праймер • Случайный Гексамерный Праймер • Контрольная GAPDH РНК • Прямой GAPDH Праймер (10 μM) • Обратный GAPDH Праймер (10 μM) • Вода, свобод

Набор для синтеза первой цепи кДНК RevertAid

Высокоэффективный синтез первой цепи кДНК для ваших исследований!

Производитель: Thermo Fisher Scientific
Артикул: K1621
Размер: 1 штука
Наличие: Под заказ

Цена по запросу

0.00€ / 0₽
Без НДС: 0.00€ / 0₽

Количество

Количество реакций:

20 реакций

Варианты:

* — цена и наличие может измениться, уточняйте в запросе

Запрос коммерческого предложения сейчас — фиксирует текущую цену, тем самым устраняется риск увеличения цены от производителя Thermo Fisher Scientific
Срок поставки от 3 недель

RevertAid синтез кДНК обратная транскрипция RT-PCR K1621 Thermo Fisher Scientific

Поставка "Набор для синтеза первой цепи кДНК RevertAid" c доcтавкой по России

Оптимальные условия поставки оригинальной продукции: "Набор для синтеза первой цепи кДНК RevertAid", арт. K1621 из категории Наборы и мастер-миксы для синтеза кДНК от представителя Thermo Fisher Scientific в России.

Для уточнения цены позиции: "Набор для синтеза первой цепи кДНК RevertAid" (p/n: K1621 ) или получения коммерческого предложения, воспользуйтесь формой ниже.

+7 (915) 099-44-06

partslab.solutions@gmail.com

Вопрос-ответ

Какие шаги предпринять при проведении синтеза первой цепи кДНК с использованием шаблона низкой чистоты (например, ингибиторы в образце РНК)?

Следовые количества реагентов, используемых в протоколах очистки РНК, могут оставаться в растворе и ингибировать синтез первой цепи, например, SDS, EDTA, соли гуанидина, фосфат, пирофосфат, полиамины, спермидин. Для удаления следовых загрязнений мы рекомендуем повторно осадить РНК этанолом и промыть осадок 75% этанолом, или повторно очистить РНК.

Когда следует выбирать обычную RevertAid RT или Maxima RT, а когда RevertAid H-minus RT или Maxima H-minus RT?

В целом, полезно минимизировать активность РНКазы H, когда вы стремитесь получить длинные транскрипты для клонирования кДНК. РНКаза H деградирует РНК из РНК-ДНК дуплексов, что может привести к укороченной кДНК во время обратной транскрипции длинной мРНК. Также рекомендуется использовать RTs без активности РНКазы H для независимого от матрицы добавления C нуклеотидов. В отличие от этого, обратные транскриптазы с собственной активностью РНКазы H часто предпочтительны в приложениях qPCR.

Насколько важно качество РНК-матрицы для обратной транскрипции?

Чистота и целостность РНК необходимы для синтеза и количественного определения кДНК. Всегда оценивайте целостность РНК перед синтезом кДНК. Используйте свежеприготовленную РНК. Многократные циклы замораживания/оттаивания образца РНК и синтезированной кДНК не рекомендуются. Избегайте загрязнения РНКазой и утилизируйте РНК низкого качества.

Обладают ли обратные транскриптазы Thermo Scientific (RevertAid RT, RevertAid H-minus RT, Maxima RT и Maxima H-minus RT) терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазной (TdT) активностью?

Все обратные транскриптазы Thermo Scientific обладают собственной TdT-активностью, хотя и в разной степени в зависимости от условий реакции. Для добавления C-нуклеотидов, не зависящих от матрицы (как для экспериментов SMART и RACE), эта специфическая TdT-активность может быть индуцирована Mn2+. Мы рекомендуем Maxima H- или RevertAid H- minus RT для этой цели.

Когда следует выбирать обычную обратную транскриптазу RevertAid RT или Maxima RT вместо RevertAid H Minus RT или Maxima H Minus RT?

Как правило, выгодно минимизировать активность РНКазы H при стремлении получить длинные транскрипты для клонирования кДНК. РНКаза H разрушает РНК из РНК-ДНК дуплексов, что может привести к укороченной кДНК во время обратной транскрипции длинной мРНК. Также рекомендуется использовать обратные транскриптазы без РНКазы H для не зависимого от матрицы добавления нуклеотидов C. В отличие от этого, обратные транскриптазы с собственной активностью РНКазы H часто предпочитают в приложениях qPCR.

Какой точностью обладают обратные транскриптазы RevertAid и Maxima?

Точность обратных транскриптаз RevertAid и Maxima такая же, как и у дикого типа M-MuLV RT, и составляет примерно 1 ошибку на 15 000-27 000 синтезированных нуклеотидов.

Обладают ли обратные транскриптазы Thermo Scientific (RevertAid RT, RevertAid H Minus RT, Maxima RT и Maxima H Minus RT) терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазной (TdT) активностью?

Все обратные транскриптазы Thermo Scientific (RevertAid RT, RevertAid H Minus RT, Maxima RT и Maxima H Minus RT) обладают внутренней TdT активностью, хотя и в разной степени, в зависимости от условий реакции. Для добавления шаблон-независимых C-нуклеотидов (как в экспериментах SMART и RACE), эта специфическая TdT активность может быть индуцирована Mn2+. Для этой цели мы рекомендуем использовать Maxima H Minus RT или RevertAid H Minus RT.