Система синтеза первой цепи SuperScript™ IV для RT-PCR, доступная с ezDNase или без него, оптимизирована для синтеза первой цепи кДНК из очищенной поли(A)+ или тотальной РНК. Система включает SuperScript™ IV обратную транскриптазу (RT), запатентованный мутант MMLV, который обеспечивает надежный и воспроизводимый синтез кДНК в реакциях обратной транскрипции. Система синтеза первой цепи SuperScript™ IV с ezDNase также обладает способностью удалять возможное загрязнение геномной ДНК.

Система SuperScript™ IV значительно улучшена по сравнению с системой на основе SuperScript™ III в отношении устойчивости к ингибиторам, процессивности и скорости реакции, сохраняя при этом все преимущества предыдущей системы, включая повышенную термостабильность, высокоэффективный синтез полноразмерной кДНК и сниженную активность РНКазы. Система SuperScript™ IV разработана для обеспечения надежного, стабильного и быстрого синтеза кДНК в присутствии ингибиторов, содержащихся в широком спектре образцов, которые приводят к неэффективной работе других доступных в настоящее время RT. Чрезвычайно упрощенный этап удаления геномной ДНК в системе синтеза первой цепи SuperScript™ IV с ezDNase значительно сокращает время всего протокола обратной транскрипции и уменьшает возможные вариации в экспрессии генов из-за потери или повреждения РНК во время обычной обработки ДНКазой. Система SuperScript™ IV с ezDNase - лучший выбор для производительности и гибкости в приложениях RT-PCR. Мы рекомендуем ее для всех приложений RT-PCR, особенно когда воспроизводимость и надежность являются первостепенной задачей и когда ингибиторы в образце РНК могут мешать синтезу кДНК, приводя к смещениям в исследованиях экспрессии генов.

Обе системы SuperScript™ IV содержат все компоненты, необходимые для реакций обратной транскрипции, а также дополнительный контрольный ген и праймеры, и обеспечивают гибкость настройки RT в соответствии с потребностями вашего приложения.

Особенности системы синтеза первой цепи SuperScript™ IV:

• Значительно улучшенная устойчивость к различным ингибиторам, которые могут мешать синтезу кДНК
• Надежный и специфичный синтез кДНК в широком диапазоне типов образцов
• Более быстрая реакция обратной транскриптазы, которая сокращает время инкубации с >50 мин до 10 мин
• Значительно лучшая процессивность по сравнению с SuperScript™ III RT
• Упрощенный этап удаления геномной ДНК (только система SuperScript™ IV с ezDNase)

Источник фермента

Очищен из E. coli, экспрессирующей ген pol M-MLV, модифицированный для повышения термостабильности, периода полураспада, процессивности и устойчивости к ингибиторам, а также для снижения активности РНКазы H.

Контроль качества

Анализы на эндодезоксирибонуклеазу, экзодезоксирибонуклеазу и рибонуклеазу; и выход и длина продукта кДНК

Определение единицы активности

Одна единица SuperScript™ IV RT - это количество фермента, необходимое для включения 1 нмоль дезоксирибонуклеотида в кислотно-осаждаемый материал за 10 мин при 37°C с использованием poly(A) oligo(dT)12-18 в качестве матрицы/праймера.

Условия реакции

50 мМ Tris-HCl (pH 8.3), 4 мМ MgCl2, 10 мМ DTT, 50 мМ KCl, 0.5 мМ dTTP, 0.4 MBq/мл [3H]-dTTP, 0.4 мМ poly(A) oligo (dT)12-18 и фермент в 20 мкл в течение 10 мин при 37°C

Только для исследовательских целей. Не для использования в диагностических процедурах.