Dynamis™ AGT™ Medium, 10 л, без сыворотки, химически определенный, без протеинов, в форме порошка

Для достижения максимальных титров с Dynamis AGT Medium (кат. номера A2617501, A2617502, A2617503, A2617504) мы рекомендуем использовать добавки EfficientFeed A+, B+ и/или C+ AGT. Сначала мы рекомендуем попробовать добавку EfficientFeed C+ AGT (кат. номера A2503101, A2503104, A2503105) и добавку EffiientFeed C+ 2X (кат. номера A3937601, A3937602), а если специфическая продуктивность снижается на поздних стадиях культивирования, попробуйте добавить FunctionMAX TiterEnhancer (кат. номера A1501001, A1501002). Добавки не следует добавлять до достижения половинной пиковой плотности клеток для культур, не дополненных полными питательными добавками, такими как добавки EfficientFeed.

Примечание: при культивировании клеток без полных питательных сред для периодического культивирования с подпиткой мы рекомендуем не допускать падения уровня глюкозы в культуре ниже 2 г/л, добавляя глюкозу по мере необходимости (более подробную информацию см. в руководстве пользователя).

При использовании среды Dynamis AGT Medium (Cat. Nos. A2617501, A2617502, A2617503, A2617504) для культивирования клеточной линии CHO, отличной от системы экспрессии гена глутаминсинтетазы (GS-CHO), рекомендуется добавление 2-8 мМ L-глутамина или аналогичного количества добавки GlutaMAX (Cat. No. 35050079, 35050061).

Примечание: Рекомендуется добавлять глюкозу по мере необходимости, чтобы уровень глюкозы в культуре не опускался ниже 2 г/л (более подробную информацию см. в руководстве пользователя).

Пожалуйста, ознакомьтесь с процедурой последовательной адаптации, описанной ниже. Если у вас возникли трудности с переходом к определенному соотношению, пересевайте клетки 2-3 раза при предыдущем соотношении.

1. При последовательной адаптации клеток CHO, выращенных в обычной среде с 5-10% добавлением сыворотки или другой бессывороточной среде, используйте плотность посева 3 X 10E5-4 X 10E5 жизнеспособных клеток/мл.
2. Контролируйте рост клеток с помощью автоматического счетчика клеток Countess до тех пор, пока плотность жизнеспособных клеток не достигнет ≥ 1 X 10E6 клеток/мл.
3. Разбавьте клетки, используя соотношение 25:75 полной среды Dynamis AGT Medium к исходной среде. Мы рекомендуем поддерживать резервные культуры в исходном соотношении среды до достижения успеха с новой средой соотношения. При каждом последующем пассаже разбавляйте клетки постепенно увеличивающимися соотношениями полной среды Dynamis AGT Medium к исходной среде (25:75, 50:50, 75:25, 90:10, затем 100% Dynamis AGT Medium). Для достижения стабильного роста может потребоваться несколько пассажей на каждом этапе.
4. После нескольких пассажей в 100% Dynamis AGT Medium количество жизнеспособных клеток должно достигать не менее 2 X 10E6 клеток/мл с жизнеспособностью ≥85% в течение 3-4 дней после посева культуры. На этом этапе культура считается адаптированной к Dynamis AGT Medium.