iBind Cards: Карты для автоматизированного вестерн-блоттинга

Чтобы отмыть и повторно обработать блот, обработанный с использованием iBind Western Device или iBind Flex Western Device, сначала отмойте блот вне системы, используя предпочитаемый вами протокол. После протокола отмывки промойте блот в дистиллированной воде в течение 5 минут. Повторная блокировка не требуется, поскольку iBind Solution выполнит этот шаг во время повторной обработки. Наконец, повторно обработайте новыми антителами с помощью iBind Western Device или iBind Flex Western Device, начиная с этапа подготовки мембраны.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our .

Да, для каждого миди-блота, мини-блота или вертикально разрезанной полоски подготовьте соответствующие первичные антитела вместе в одной пробирке с раствором iBind FD/ iBind Flex FD. Подготовьте соответствующие вторичные антитела вместе в другой пробирке с раствором iBind FD/ iBind Flex FD. Не смешивайте первичные и вторичные антитела перед загрузкой в устройство. Все первичные и вторичные антитела следует разводить в соответствии с рекомендациями, изложенными в руководстве пользователя или краткой справочной карте. При обнаружении нескольких мишеней одного и того же вида можно использовать ту же концентрацию вторичных антител, что и при обнаружении одной мишени. Нет необходимости увеличивать концентрацию для каждой дополнительной мишени. Загрузите мультиплексированные антитела в устройство как обычно.
Предупреждение: Учитывайте перекрестную реактивность вторичных антител при мультиплексировании (например, кролик анти-козий IgG и коза анти-мышиный IgG, вероятно, будут перекрестно реагировать).

Да, и устройство iBind Western, и устройство iBind Flex Western хорошо работают с вторичными антителами, конъюгированными с Alexa Fluor Plus.

При достаточно сильном прижатии роликом карта iBind/iBind Flex будет слегка прогибаться в области мембраны, в результате чего верхняя и нижняя части карты приподнимутся. См. руководство пользователя iBind/iBind Flex для получения более подробной информации.

Помимо того, что карта iBind Flex примерно в 1,7 раза шире, она также включает в себя линии выравнивания, напечатанные на обратной стороне, которые появляются при добавлении раствора на карту, чтобы помочь в правильном горизонтальном размещении нескольких мини-блотов или вертикально разрезанных стрип-блотов.

Составы идентичны как для стандартных растворов, так и для растворов для флуоресцентной детекции (FD). Единственное различие заключается в поставляемом количестве, поэтому наборов iBind Flex Solution Kits достаточно для 10 миди-блотов, 20 мини-блотов или 60 вертикально разрезанных стрип-блотов.

Да, для запуска одного мини-блота или до трех вертикально разрезанных стрип-блотов. Однако, при использовании Mini или Multi-Strip Inserts, ячейки, не контактирующие с картой, должны оставаться пустыми.

Пожалуйста, используйте протокол, упомянутый на Странице 13 руководства (https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/ibind_man.pdf) при использовании iBind Western System в сочетании с LI-COR Odyssey Imaging System. Мы не рекомендуем использовать раствор LI-COR.

Системы iBind Western – это настольные устройства, которые автоматизируют этапы иммунодетекции. Эти устройства не используют внешний источник питания и полагаются на механическое давление для создания последовательного латерального потока (SLF) иммунодетекционных реагентов, чтобы выполнять блокировку, связывание антител и отмывки без участия рук для рабочих процессов вестерн-блоттинга.

Доступны две системы iBind Western:
i) содержащая оригинальное устройство iBind Western Device, которое вмещает один мини-блот за раз
ii) содержащая устройство iBind Flex Western Device, которое вмещает один или два мини-блота, один миди-блот или до шести вертикально разрезанных полосок мембраны (для отдельных антител) за раз.

Если PVDF-мембрана высохла, важно предварительно активировать ее 100% метанолом, а затем промыть в дистиллированной воде перед погружением в раствор iBind/раствор iBind Fluorescent Detection (FD). Нет необходимости активировать PVDF-мембрану, которая только что вышла из трансферного блока и была помещена в раствор iBind/раствор iBind Fluorescent Detection (FD).

Промывайте устройство iBind Western под проточной водой после каждого использования и дайте ему высохнуть перед дальнейшим использованием. Не рекомендуется использовать моющие средства, так как любые остатки моющего средства могут повлиять на результаты.Чтобы максимально продлить срок службы пружин в устройстве iBind Western, храните устройство с разблокированной защелкой и открытой крышкой, как показано на странице 23 руководства.

Достаточно заблокировать мембрану в растворе iBind / растворе для флуоресцентной детекции iBind (FD) на время, необходимое для приготовления разведений антител. Нет необходимости блокировать мембрану на ночь в блокирующем растворе. Мембрана будет подвергнута дополнительной блокировке в растворе iBind / растворе для флуоресцентной детекции iBind (FD) до того, как первичное антитело достигнет мембраны.

Да, мембраны меньшего размера, чем 9 см x 9 см, можно использовать с устройством iBind Western. Рекомендуется размещать полоски или меньшие блоты по центру. При использовании мембран большего размера необходимо следить за тем, чтобы никакая часть мембраны не соприкасалась со стопкой на карте iBind.

Мы не рекомендуем использовать собственные растворы. Раствор iBind и раствор iBind Fluorescent Detection (FD) обладают определенной вязкостью и оптимизированы для последовательного бокового потока, который является принципом работы устройства iBind Western. Мы не можем гарантировать производительность при использовании других растворов.

Оригинальная система iBind Western (кат. № SLF1000) состоит из:
- Устройство iBind Western
- Валик для блоттинга iBind
- Крышка окна iBind

Вам потребуется приобрести следующие предметы отдельно:
- Карты iBind (кат. № SLF1010)
- Набор растворов iBind (кат. № SLF1020) для приготовления блокирующих, разбавляющих и промывочных буферов для хемилюминесцентной или хромогенной детекции
- Набор растворов для флуоресцентной детекции iBind (кат. № SLF1019) для приготовления блокирующих, разбавляющих и промывочных буферов для флуоресцентной детекции
- Набор для хемилюминесцентной детекции AP Mouse Invitrogen (кат. № SLF1021) или Набор для хемилюминесцентной детекции AP Rabbit Invitrogen (кат. № SLF1022)