Detoxi-Gel™: гель для удаления эндотоксинов

Возможно, что колонка могла быть загрязнена эндотоксином во время хранения и обращения. Эквилибрация колонки с 1% дезоксихолатом натрия с последующей промывкой без пирогенов гарантирует, что колонка не содержит эндотоксинов до добавления образца. Колонку необходимо регенерировать после удаления эндотоксинов из образца, чтобы убедиться, что эндотоксин, связавшийся с колонкой из образца, смыт.

Колонка Thermo Scientific Detoxi-Gel объемом 1 мл имеет свободный объем 0,3-0,5 мл. Это объем раствора, который необходимо собрать с колонки, прежде чем образец начнет выходить из колонки.

1. Уравновесьте колонку 5 объемами колонки 1% дезоксихолата натрия в воде, не содержащей пирогенов, а затем 3 объемами колонки воды, не содержащей пирогенов, или выбранного буфера.
2. Нанесите образец, убедившись, что не превышаете связывающую способность геля.
3. Соберите образец гравитационным протоком, добавив воду, не содержащую пирогенов, или буфер.
4. Регенерируйте колонку 5 объемами колонки 1% дезоксихолата натрия в воде, не содержащей пирогенов, а затем 3 объемами колонки воды, не содержащей пирогенов.

Носитель Detoxi-Gel способен связывать до 2 мкг ЛПС/мл геля. Поскольку одна единица эндотоксина (EU) составляет приблизительно 0,1 нг/мл, гель потенциально способен связывать до 20 000 EU/мл геля.

Detoxi-Gel Support состоит из 6% сшитой агарозы в форме шариков, на которую иммобилизован полимиксин B. Полимиксин B — это антибиотик, содержащий катионный циклопептид с цепью жирной кислоты, который может нейтрализовать биологическую активность эндотоксинов, связываясь с липидом A бактериального липополисахарида (ЛПС). После того, как эндотоксин из образца связывается с иммобилизованным полимиксином B, образец можно собрать, а эндотоксин можно элюировать с использованием 1% дезоксихолата натрия.

Да. Например, известно, что поверхностный антиген гепатита B прилипает к колонке. Добавление 0,5 M NaCl к образцу и буферам для элюции иногда может разорвать сродство к определенным веществам, которые связываются неспецифически, высвобождая их из геля.

Колонки можно повторно использовать не менее 10 раз без потери активности.

Да. Другие детергенты и высокие концентрации хаотропов (мочевина и гуанидин) могут снизить аффинность полимиксина B к ЛПС. Белки, такие как БСА, могут прочно связываться с эндотоксином, уменьшая его способность взаимодействовать и связываться с носителем Detoxi-Gel. Это снижение связывающей способности иногда можно компенсировать увеличением объема носителя Detoxi-Gel по отношению к ЛПС. Однако некоторые белки прочно связываются с эндотоксином, не ингибируя его связывание с носителем. В этом случае белок останется связанным с гелем вместе с эндотоксином, что может привести к потере целевого белка.