RNAlater™ Stabilization Solution, 250 мл

Совместим только набор MagMax96 для выделения тотальной РНК для микрочипов (кат. № AM1839), поскольку в нем используется реагент Trizol, и большая часть солей, перенесенных из реагента RNAlater, удаляется на этапах лизиса и отделяется от водного слоя РНК сверху. Для других наборов MagMax необходима оптимизация. Высокое содержание соли не является оптимальным для этапов выделения РНК с помощью MagMax.

RNAlater-ICE Frozen Tissue Transition Solution можно использовать для погружения замороженного образца, а затем разморозить его на ночь при температуре -20 градусов C или ниже. После размораживания ткани можно обрабатывать как свежие ткани, используя стандартные процедуры выделения РНК.

Найдите дополнительные советы и ресурсы.

Нагрейте раствор до 37 градусов C в течение 15 минут и перемешайте, чтобы снова растворить осадок.

Мы не рекомендуем повторно использовать реагент RNAlater или реагент RNAlater ICE.

Известно, что стабилизирующий раствор RNAlater и раствор для перевода замороженных тканей RNAlater-ICE реагируют с растворами гипохлорита, такими как обычный отбеливатель. В результате реакции выделяется газообразный хлор и выделяется тепло. Аналогичная реакция может произойти и с другими окислителями. Если вы подозреваете, что образцы могут содержать отбеливатель или другие окислительные реагенты, мы рекомендуем работать в вытяжном шкафу с использованием надлежащей защитной одежды и оборудования.

Хотя мы не тестировали это у себя, есть данные, что можно использовать ткани, сохраненные в растворе для стабилизации RNAlater, а затем проводить лазерную микродиссекцию. Пожалуйста, смотрите ссылку ниже:
Thelen P, Burfeind P, Grzmil M et al. (2004) cDNA microarray analysis with amplified RNA after isolation of intact cellular RNA from neoplastic and non-neoplastic prostate tissue separated by laser microdissections. Int J Oncol 24(5):1085-1092.

Найдите дополнительные советы, информацию по устранению неполадок и ресурсы в нашем

РНК, хранящаяся в растворе для стабилизации RNAlater, стабильна в течение 1 дня при 37 градусах C, 1 недели при 25 градусах C, 1 месяца при 4 градусах C или длительное время при -20 градусах C.

Для образцов, которые уже заморожены, используется другой продукт – RNAlater-ICE. Реагент RNAlater-ICE переводит ткань из замороженного в незамороженное состояние. Замороженную ткань просто помещают в реагент RNAlater-ICE и оставляют при -20 градусах C на ночь. Затем обработанные ткани можно использовать непосредственно в стандартных протоколах гомогенизации и выделения и обрабатывать как свежие ткани.
Реагент RNAlater и реагент RNAlater-ICE обеспечивают гибкость при сборе и хранении образцов и помогают обеспечить сохранение высококачественной РНК в образцах. Оба доступны в различных удобных размерах.

RNAlater не должен влиять на последующую ПЦР-амплификацию, если образец был должным образом очищен перед выделением ДНК, как указано в руководстве по раствору для стабилизации RNAlater.

Найдите дополнительные советы и ресурсы.

Раствор для стабилизации RNAlater стабилизирует и защищает клеточную РНК в интактных, незамороженных образцах тканей, устраняя необходимость немедленной обработки образцов тканей или замораживания образцов в жидком азоте для последующей обработки. Другими словами, это реагент для сохранения РНК.

Рекомбинантный ингибитор рибонуклеаз RNaseOUT является мощным неконкурентным ингибитором рибонуклеаз панкреатического типа, таких как RNase A, и используется для предотвращения деградации РНК в различных приложениях, таких как синтез кДНК, ОТ-ПЦР и транскрипция и трансляция in vitro. RNAseOUT ингибирует RNase A, RNase B и RNase C. Другими словами, рекомбинантный ингибитор рибонуклеаз RNaseOUT в основном используется в анализах для предотвращения деградации РНК.

Образцы в реагенте RNAlater можно безопасно отправлять на влажном льду в течение нескольких дней. Для более длительной транспортировки используйте сухой лед.

Дополнительные советы и ресурсы можно найти.

Да, вы сможете сортировать клетки методом проточной цитометрии с флуоресцентной активацией (FACS) после обработки раствором для стабилизации RNAlater. Если у вас возникнут проблемы из-за вязкости раствора RNAlater, вам может потребоваться разбавить его холодной водой, не содержащей нуклеаз. Это не повлияет на защиту РНК. Образцы следует обрабатывать быстро и как можно более холодными. Вы также сможете проводить масс-спектрометрию на образцах, обработанных раствором для стабилизации RNAlater. Пожалуйста, обратите внимание, что соль может образовывать аддукты на белке на этапе десорбции/ионизации. Чтобы избежать этой проблемы, диализуйте образец, чтобы избавиться от всей соли.

Ткани, хранящиеся в реагенте RNAlater, совместимы со всеми широко используемыми методами выделения РНК, включая продукты для выделения на основе одного реагента, такие как реагент TRIzol, и все наши наборы для выделения РНК Ambion. Также можно извлекать как геномную ДНК, так и общий белок из образцов, хранящихся в реагенте RNAlater. Реагент RNAlater денатурирует белки, поэтому он совместим только с рутинными анализами белков, такими как вестерн-блоттинг и 2D-гель-электрофорез, которые не требуют нативного белка.

Нет, ткань в стабилизирующем растворе RNAlater необходимо хранить при 4 градусах Цельсия в течение ночи.

Да, стабилизирующий раствор RNAlater использовался с изолятами Staphylococcus epidermidis. Вот ссылка, описывающая, как исследователи использовали этот раствор с грамположительными бактериями:

Handke LD, Conlon KM, Slater SR et al. (2004) Genetic and phenotypic analysis of biofilm phenotypic variation in multiple Staphylococcus epidermidis isolates. J Med Microbiol 53(Pt5):367-344.

Реагент RNAlater был успешно протестирован со многими различными тканями (включая мозг, сердце, почки, печень, скелетные мышцы, жир, легкие) и типами клеток (E. coli, Drosophila, культивируемые клетки млекопитающих и некоторые растительные клетки). Реагент RNAlater также можно использовать для хранения антикоагулированной цельной крови или фракции лейкоцитов цельной крови.

Раствор для стабилизации RNAlater является бактериостатическим. Хотя бактерии не растут в растворе RNAlater, клетки остаются неповрежденными. Клетки *E. coli*, хранящиеся в растворе для стабилизации RNAlater в течение 1 месяца при 4 градусах C, остаются неповрежденными и дают недеградировавшую РНК.

Обработка образцов, хранившихся в реагенте RNAlater, намного проще, чем использование замороженных образцов. Замороженные образцы необходимо измельчить в порошок, а затем замороженный порошок перенести в пробирку для гомогенизации. Эта процедура трудоемкая, грязная, связана с риском потери образца и, что, возможно, самое важное, может привести к оттаиванию образца, что может поставить под угрозу целостность РНК. Образцы, хранящиеся в реагенте RNAlater, защищены от РНКаз, пока ткань остается в растворе, и их обычно можно разрушить с помощью более простых методов, подходящих для свежесобранных образцов (измельчение в жидком азоте требуется только для чрезвычайно твердых или жестких тканей, таких как кость или опухолевая ткань). Таким образом, в дополнение к облегчению разрушения образца, хранение в реагенте RNAlater устраняет риски потери образца и загрязнения из-за переноса или оттаивания замороженной порошкообразной ткани.

Да, набор MagMAX-96 для микрочипов для выделения тотальной РНК совместим с раствором RNAlater, поскольку в наборе используется Tri-Reagent. Следовательно, большинство солей удаляется на этапах лизиса и отделяется от водного слоя РНК сверху. Кроме того, перенос солей из раствора RNAlater не является проблемой.

Хотя мы не проводили собственных испытаний, эти ссылки предполагают, что вирус остается активным после обработки раствором для стабилизации RNAlater:

- Uhlenhaut C, Kracht M (2005) Viral infectivity is maintained by an RNA protection buffer. J Virol Methods 128(1-2):189-191.
- Kurth A (2007) Possible biohazard risk from infectious tissue and culture cells preserved with RNAlater. Clin Chem3(7):1389-1390.

Для свежих тканей просто нарежьте образцы максимальной толщиной 0,5 см в любом измерении и погрузите в 5-кратный объем реагента RNAlater.

Культивированные клетки следует осадить, ресуспендировать в небольшом объеме PBS, а затем смешать с 5-10-кратным объемом реагента RNAlater.

После помещения в реагент RNAlater образцы можно хранить до 1 дня при 37 градусах C, 1 неделю при 25 градусах C, 1 месяц или более при 4 градусах C и длительно при -20 градусах C или -80 градусах C.

И пробирки Tempus Blood RNA Tubes, и раствор для стабилизации RNAlater эффективно стабилизируют профили экспрессии мРНК, и устраняют необходимость немедленного выделения РНК после сбора образца. Однако есть несколько ключевых различий:
- Компоненты каждого стабилизирующего раствора различны. Точные компоненты и различия являются частной собственностью.
- Раствор для стабилизации RNAlater предохраняет РНК от деградации, не лизируя клетки крови.
- Образцы в растворе для стабилизации RNAlater можно безопасно хранить до 1 недели при 25 градусах C или до 1 месяца при 4 градусах C.

РНК из тканей, обработанных RNAlater, оценивалась после хранения при -20 градусах C в течение более 2 лет, что указывает на отсутствие систематической погрешности, вызванной хранением в растворе для стабилизации RNAlater.

Найдите дополнительные советы и ресурсы.

Да, ДНК можно выделить из образцов, хранящихся в растворе для стабилизации RNAlater. Пожалуйста, ознакомьтесь с протоколом здесь: . Белки сохраняются в растворе для стабилизации RNAlater; однако раствор денатурирует белки. Поэтому белок, полученный из образцов, хранящихся в нем, по-прежнему будет пригоден для таких применений, как вестерн-блоттинг или 2D-гель-электрофорез, но не для применений, требующих нативного белка.

Найдите дополнительные советы, помощь в устранении неполадок и ресурсы в .

Для образцов тканей мы рекомендуем извлечь ткань, обработанную стабилизирующим раствором RNAlater, из избытка раствора RNAlater после инкубации в течение ночи при 4 градусах C, промокнуть ткань абсорбирующей лабораторной салфеткой или бумажным полотенцем и приступить к лизису.

Для образцов клеток осадите клетки, затем слейте избыток супернатанта RNAlater. Клетки, как правило, менее хрупкие после хранения в стабилизирующем растворе RNAlater, и большинство клеток можно центрифугировать на более высоких скоростях, не вызывая лизиса клеток (5000 x g).

Найдите дополнительные советы по устранению неполадок и ресурсы.

Обрежьте ткань так, чтобы ее размер был менее 0,5 см хотя бы в одном измерении, и просто погрузите ее в 5 объемов стабилизирующего раствора RNAlater (например, для образца весом 0,5 г требуется около 2,5 мл стабилизирующего раствора RNAlater). Большинство образцов можно хранить при температуре 4 градуса C до одного месяца, при температуре 25 градусов C до одной недели или при температуре -20 градусов C неопределенно долго.

Для выделения РНК просто извлеките ткань из стабилизирующего раствора RNAlater и обработайте ее так, как если бы она была только что собрана. Большинство тканей можно гомогенизировать непосредственно в лизирующем буфере, хотя более твердые ткани, такие как кость, могут потребовать замораживания в жидком азоте и измельчения.

Стабилизирующий раствор RNAlater совместим со стандартными наборами для выделения РНК при условии, что стабилизирующий раствор RNAlater удален до начала процедуры выделения РНК.

Раствор для стабилизации RNAlater — это водный реагент для хранения тканей, который защищает клеточную РНК в интактных, незамороженных образцах тканей. Раствор для стабилизации RNAlater устраняет необходимость немедленной обработки образцов тканей или их замораживания в жидком азоте для последующей обработки.

Реагент RNAlater денатурирует белки; поэтому белок, полученный из образцов, хранящихся в реагенте RNAlater, подходит для таких применений, как вестерн-блоттинг или гель-электрофорез, но не для применений, требующих нативного белка.

Реагент RNAlater не подходит для жидких образцов, поскольку он уже имеет концентрацию 1X. Если клиентам абсолютно необходимо сохранить свои жидкие образцы с помощью реагента RNAlater, единственная рекомендация, которую мы можем дать, — добавить от 15 до 20 объемов этого раствора к одному объему их образца. Например, если у вас есть 1 мл жидкого образца, вам потребуется добавить минимум 15 мл реагента RNAlater к образцу, чтобы учесть эффект разбавления. Таким образом, для образца объемом 30 мл потребуется не менее 450 мл реагента RNAlater, чтобы минимизировать эффект разбавления реагента RNAlater и сохранить РНК.

Реагент RNAlater — это раствор с высоким содержанием солей, близкий к точке насыщения. Если в реагенте RNAlater есть кристаллы или осадок, нагрейте его при 37 градусах C с перемешиванием, повторно растворите кристаллы и используйте, как указано в руководстве. Если у вас есть ткани в реагенте RNAlater и вы обнаружили кристаллы, ткань следует перенести в новую пробирку, следя за тем, чтобы кристаллы остались позади. Для клеток лучше всего ресуспендировать клетки и дать кристаллам осесть на дно. Затем клетки, ресуспендированные в реагенте RNAlater, следует отцентрифугировать и удалить реагент RNAlater. Клеточный осадок можно хранить сам по себе без реагента RNAlater при -20 градусах C или -80 градусах C, если клетки были инкубированы в реагенте RNAlater в течение ночи.

Найдите дополнительные советы, помощь в решении проблем и ресурсы.

Да, стабилизирующий раствор RNAlater замерзнет при -80 градусах C. Мы рекомендуем обработать вашу ткань в течение ночи при 4 градусах C с помощью RNAlater, а затем удалить RNAlater перед замораживанием при -80 градусах C

Нет, раствор для стабилизации RNAlater не включает химическую фиксацию или сшивание. Он работает путем денатурации белков, включая РНКазу.

Разбавьте раствор 1:1 холодным PBS и центрифугируйте при скорости до 5000 x g (начните с меньшей скорости и увеличивайте, пока клетки не осядут в осадок). Перенесите супернатант в новую пробирку, а осадок выбросьте.

Да, вы можете выделить геномную ДНК из ткани, сохраненной в растворе для стабилизации RNAlater (Cat. No. AM7024).

Найдите дополнительные советы и ресурсы.

К сожалению, мы не предлагаем стерильную версию стабилизирующего раствора RNAlater.

Мы рекомендуем погружать образцы тканей в 5-10 объемах RNAlater на ночь при 4 градусах C, чтобы RNAlater мог распространиться по всему образцу ткани.