Среда, имитирующая плазму человека (HPLM) для культивирования клеток

Да, Gibco HPLM не содержит компонентов животного происхождения (AOF).

Да, Gibco HPLM производится на предприятии cGMP.

Существует несколько публикаций, в которых используется HPLM. Список избранных публикаций с использованием HPLM можно найти на веб-странице HPLM: https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/mammalian-cell-culture/classical-media/human-plasma-like-medium.html

Полный состав среды Gibco Human Plasma-Like Medium (HPLM) можно найти здесь .

Gibco HPLM не является средой BenchStable и не должна храниться при комнатной температуре. Рекомендуется хранить Gibco HPLM при температуре 2-8 градусов C, в защищенном от света месте.

Мы наблюдали быструю деградацию нескольких компонентов в течение нескольких дней после воздействия Gibco HPLM на обычный флуоресцентный свет. Мы также наблюдали снижение роста клеток при использовании среды, подвергшейся воздействию света.

Открытую бутылку Gibco HPLM следует использовать в течение 2-4 недель. Продолжительность использования будет зависеть от обращения с бутылкой с основным раствором. Распространенные компоненты среды чувствительны к воздействию тепла и света, например, аминокислоты, витамины и т. д.
Чтобы максимально увеличить стабильность открытой бутылки со средой, предварительно нагрейте необходимый объем среды на день в контейнере объемом 15 мл, 50 мл или другого размера. Поместите контейнер в инкубатор с температурой 37 градусов C, 5% CO2 со слегка ослабленной крышкой для обеспечения газообмена. Поместите бутылку с основным раствором обратно в холодильник, т. е. 2-8 градусов C, чтобы уменьшить воздействие тепла и света.

Предварительный нагрев среды в инкубаторе с температурой 37 градусов C, 5% CO2 предварительно отрегулирует pH и температуру до физиологических уровней. Инкубации в течение 30-60 минут или немного дольше должно быть достаточно. Предварительно нагретая среда будет более "оптимальной" для клеток, поскольку и температура, и pH будут предварительно отрегулированы до физиологических уровней.

Срок годности среды Gibco HPLM составляет 12 месяцев для невскрытой бутылки, хранящейся в рекомендуемых условиях, указанных на этикетке бутылки. Это соответствует нашим стандартным основным средам.

Да, Gibco HPLM подходит для длительного культивирования. Продолжительность будет зависеть от конкретных клеток.

Хотя мы не использовали Gibco HPLM для культивирования в больших масштабах, основываясь на данных, которые у нас есть для других применений, он должен работать.

Мы специально не тестировали Gibco HPLM на клетках приматов. Если клетки приматов выращиваются с использованием классических синтетических сред для культивирования клеток, включая MEM, DMEM, RPMI 1640 и DMEM/F-12, они должны расти в Gibco HPLM.

Да, клетки, растущие в Gibco HPLM, можно криоконсервировать. Мы рекомендуем использовать те же протоколы криоконсервации, которые вы используете со стандартными базальными средами.

Да, криоконсервированные клетки можно размораживать непосредственно в среде Gibco HPLM. Мы рекомендуем использовать те же протоколы разморозки, которые вы используете с традиционными базальными средами.

Мы рекомендуем использовать те же условия посева клеток с Gibco HPLM, что и с обычными базальными средами. Было показано, что некоторые клеточные линии растут немного медленнее в Gibco HPLM, чем в обычных средах, и могут требовать более высокой плотности посева или большей продолжительности между пассажами.

Мы рекомендуем использовать те же условия посева клеток с Gibco HPLM, что и с обычными базальными средами. Было показано, что некоторые клеточные линии растут немного медленнее в Gibco HPLM, чем в обычных средах. При использовании Gibco HPLM клетки можно оставлять в культуре на более длительное время или засевать с немного большей плотностью.

Большинство клеточных линий, культивируемых с использованием классических синтетических сред для культивирования клеток, включая MEM, DMEM, RPMI 1640 и DMEM/F-12, можно культивировать с помощью Gibco HPLM. Для некоторых клеточных линий могут быть некоторые различия в скорости роста.

Внутренние тесты с использованием Gibco HPLM были проведены на следующих клеточных линиях. Во всех протестированных клеточных линиях HPLM успешно поддерживала рост клеток. Эти клеточные линии не требовали какой-либо адаптации к HPLM и были непосредственно пересеяны в HPLM.

Протестированные типы клеток: HeLa, A549, MCF-7, MDA-MB-231, LNCaP, HCT116, A375, WM115, U-2 OS, первичные NK-клетки, THP-1, Jurkat, PLB-985, NOMO-1 и Sp2

Формула Gibco HPLM основана на среде, представленной в исследовательской статье, опубликованной в журнале Cell (Cantor et al., 2017, Cell 169, 258-272). Gibco HPLM не содержит 2-гидроксимасляную кислоту (2-HBA), которая присутствовала в формуле, опубликованной в Cell. Чтобы добавить 2-HBA в Gibco HPLM, выполните следующие действия:
- Создайте 250-кратный запас 2-HBA в воде, смешав 158 мг 2-HBA (Alfa Aesar, Cat. No. A18636-03) со 100 мл воды
- Простерилизуйте фильтрованием 250-кратный запас раствора 2-HBA
- Асептически добавьте 2 мл запаса раствора 2-HBA к 498 мл HPLM
Gibco HPLM также содержит 4 дополнительных компонента, которые помогают ей лучше имитировать плазму крови человека: ацетилкарнитин, альфа-кетоглутарат, малат и уридин.

Для достижения наилучших результатов мы рекомендуем добавлять в Gibco HPLM не менее 10% FBS. Мы провели тесты на небольшом количестве типов клеток, используя концентрацию 5% FBS, и в этих случаях не наблюдали ухудшения производительности.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Mammalian Cell Culture Basics Support Center.

Мы рекомендуем добавлять в Gibco HPLM не менее 10% FBS для достижения наилучших результатов. Если ваш метод культивирования требует добавления более 10% FBS при использовании стандартных базальных сред, мы рекомендуем использовать ту же концентрацию и с HPLM.

Полные среды для культивирования клеток чаще всего состоят из базовой среды, содержащей определенные метаболиты и соли, дополненной фетальной бычьей сывороткой (FBS), которая дополнительно вносит неопределенный коктейль факторов роста, гормонов, микроэлементов и других компонентов, критически важных для роста клеток. Для создания полной среды на основе HPLM рекомендуется добавление 10% диализованной FBS (кат. № 26400044), чтобы минимизировать вклад полярных метаболитов на неопределенных уровнях. Необработанную FBS также можно диализировать вручную, используя диализные трубки SnakeSkin, 3.5K MWCO (кат. № 88242) в качестве альтернативы покупке диализованной FBS. Если на вашу конкретную задачу не влияют уровни полярных метаболитов, присутствующих в сыворотке, или если ваши клетки не переносят диализованную сыворотку, вместо диализованной FBS можно использовать стандартную или термоинактивированную FBS.

Gibco HPLM разработан так, чтобы имитировать естественную клеточную среду, встречающуюся в организме. HPLM предоставляет исследователям возможность изучать влияние физиологически релевантной клеточной среды на их конкретные области применения.

Широко используемые классические синтетические среды для культивирования клеток, включая MEM, DMEM, RPMI 1640 и DMEM/F-12, содержат глюкозу, аминокислоты, витамины и соли в концентрациях, которые в значительной степени не соответствуют концентрациям, обнаруженным в плазме крови человека. Этим средам также не хватает дополнительных компонентов, необходимых для имитации метаболического профиля плазмы крови человека. Gibco HPLM содержит более 60 полярных метаболитов, таких как аминокислоты, нуклеиновые кислоты, сахара и небольшие органические кислоты, в концентрациях, обнаруженных в плазме крови человека. Концентрации солей в HPLM имитируют концентрации солей, обнаруженные в плазме крови человека.