Geltrex™ Reduced-Growth Factor Basement-Membrane Matrix, LDEV-free, stem-cell qualified, 5 mL

Нет, готовая к применению матрица Geltrex была разработана для использования с системой StemPro hESC SFM. Использование с другими системами сред для PSC не рекомендуется.

Для других систем сред для PSC мы рекомендуем матрицу базальной мембраны Geltrex LDEV-Free, hESC-Qualified, Reduced Growth Factor (кат. № A1413301, A1413302).

Geltrex hESC-Qualified, Ready-To-Use, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1569601) — это предварительно разбавленный продукт Geltrex, готовый к использованию для покрытия культуральных сосудов. Нет необходимости в дальнейшем разбавлении раствора. Продукт также прошел контроль качества с использованием hESC, чтобы гарантировать, что каждая партия поддерживает прикрепленную плюрипотентность этих клеток. Полное описание продукта можно найти здесь:

Geltrex hESC-Qualified, Ready-To-Use, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1569601)

Geltrex LDEV-Free, hESC-Qualified, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1413301, A1413302) — это 'концентрированная' версия Geltrex hESC-Qualified, Ready-To-Use, указанного выше. Вы можете предварительно разбавить этот концентрированный раствор для предварительного покрытия культурального сосуда для выращивания hESC в желаемой концентрации использования. Эта матрица Geltrex также прошла контроль качества с использованием hESC, чтобы гарантировать, что каждая партия поддерживает прикрепленную плюрипотентность этих клеток. Полное описание продукта можно найти здесь:

Geltrex LDEV-Free, hESC-Qualified, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1413301, A1413302)

Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1413201, A1413202) — это то же самое, что и продукт, указанный выше. Однако он не был протестирован на предмет подтверждения того, что он будет поддерживать рост и расширение hESC. Это 'общая' версия, не относящаяся к конкретному типу или линии клеток. Полное описание продукта можно найти здесь:

Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1413201, A1413202)

Geltrex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № A1413201, A1413202)

Мы рекомендуем размораживать Geltrex LDEV-Free, hESC-Qualified, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (кат. № 1413301, 1413302) при 4 градусах C перед приготовлением маточного раствора. На льду сделайте разведение 1:1 с DMEM/F-12 и разделите на меньшие объемы. Аликвоты маточного раствора следует хранить при -20 градусах C или использовать немедленно. После разморозки маточный раствор следует немедленно использовать для покрытия планшетов.

Мы рекомендуем использовать Gibco Geltrex LDEV-Free, hESC Qualified Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix (Cat. No. A1413301 или A1413302) или Gibco Vitronectin (VTN-N) Recombinant Human Protein, Truncated (Cat. No. A14700) для применения, не содержащих ксеноматериалы.

У нас нет сравнительных данных для этих двух продуктов Geltrex. Мы рекомендуем использовать Geltrex LDEV-Free, hESC-Qualified, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix для гепатоцитов. Мы не проводили значительного количества тестов с использованием Geltrex hESC-Qualified, Ready-To-Use, Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrix на этих клетках.

ЭС клетки человека обычно характеризуются их типичной морфологией (они растут в виде плотно упакованных кластеров маленьких клеток с высоким соотношением ядра к цитоплазме); экспрессией поверхностных маркеров; RT-PCR обнаружением экспрессии генов, специфичных для стволовых клеток (таких как Oct3/4, Sox2 и Nanog); окрашиванием щелочной фосфатазой и анализом активности теломеразы. Наиболее часто используемые ES-специфические поверхностные маркеры включают эмбриональные антигены, специфичные для стадии, SSEA-3 и SSEA-4 для ЭС клеток человека. Другие ES-специфические поверхностные антигены также включают TRA-1-60 и TRA-1-81.

Эмбриональные стволовые клетки человека получают из внутренних клеточных масс человеческих бластоцист, выделенных с помощью иммунохирургии с кроличьей антисывороткой к клеткам BeWO (линия клеток трофобласта человека) (Science 282:1145 (1998)).

Эмбриональные стволовые (ЭС) клетки получают из раннего эмбриона млекопитающих и способны к неограниченной, недифференцированной пролиферации in vitro, сохраняя при этом свой потенциал к дифференцировке в широкий спектр тканей взрослого организма, включая половые клетки. Плюрипотентность ЭС-клеток обычно демонстрируется in vitro путем индуцирования дифференцировки ЭС-клеток в эмбриоидные тельца и проверки маркеров, специфичных для линий дифференцированных клеток в трех зародышевых листках (эндо, мезо и эктодерма), или путем введения их иммунодефицитным мышам и определения типов клеток, образующихся в тератомах.

Вирус, повышающий уровень лактатдегидрогеназы (LDEV), инфицирует макрофаги мышей и вызывает персистентные инфекции у лабораторных мышей. LDEV, РНК-вирус, изменяет физиологию in vivo и является распространенным загрязнителем биологических материалов, полученных из трансплантируемых линий опухолевых клеток.

Да, попробуйте различные разведения для покрытия планшетов. Некоторые клиенты используют разведение 1:100 и получают лучшие результаты. Оптимальное разведение зависит от клеточной линии.

Geltrex Matrix — это экстракт базальной мембраны, который содержит коллаген IV, ламинин и другие матриксные белки и факторы роста, необходимые для адгезии клеток. AlgiMatrix Matrix содержит только альгинат, который не способствует адгезии клеток. В альгинатных губках нет ничего, с чем могли бы взаимодействовать клетки.

Да, это нормально. Это наблюдалось в процессе разработки продукта. Удалите раствор Gibco Geltrex Matrix после предварительного покрытия и добавьте клетки как обычно. Человеческие эмбриональные стволовые клетки H9 культивировались на чашках, предварительно покрытых готовой к использованию матрицей Gibco Geltrex, с этим наблюдением в процедуре предварительного покрытия.

Если вы хотите культивировать клетки после извлечения из матрикса, мы рекомендуем сначала промыть клетки, а затем использовать трипсин/ЭДТА, реагент TrypLE или раствор коллагеназы (3000 ЕД/мл) и гиалуронидазы (1000 ЕД) в DMEM с низким содержанием глюкозы. Если вы хотите отслеживать маркеры клеточной поверхности, мы рекомендуем удалять клетки механическим путем, например, интенсивной промывкой или осторожным соскабливанием.

Обратите внимание, что фенотип клеток может измениться, если их культивировать в 2D после удаления из матрикса.

Да, эти продукты были разработаны для совместной работы.

Gibco Geltrex Matrix – это растворимая форма экстракта базальной мембраны с пониженным фактором роста (RGF), очищенная из мышиной опухоли Engelbreth-Holm-Swarm. Исторически эти препараты содержали вирус, повышающий уровень лактатдегидрогеназы (LDEV), который не влияет на характеристики материала, но может вызывать опасения в определенных применениях, таких как ксенотрансплантаты или другие клинически ориентированные исследования. В настоящее время доступны новые методы производства, позволяющие удалять этот вирус. Полученный материал, не содержащий LDEV, тестируется с использованием методов ПЦР для подтверждения отсутствия вируса.

Gibco Geltrex Matrix и коллаген (крысиный хвост и бычий) можно использовать как в качестве раствора для покрытия, так и в качестве трехмерного гелевого матрикса. CELLstart Substrate был разработан для использования в качестве ксеногенной подложки только для ESC приложений (в качестве заменителя Gibco Geltrex Matrix или Matrigel Matrix, которые имеют животное происхождение). AlgiMatrix Matrix представляет собой трехмерный матрикс каркасного типа, который не поддерживает прикрепление клеток, но обеспечивает хорошую среду для выращивания сфероидов, которые можно легко собрать для последующих применений.