Описание

Thermo Scientific Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix – это удобный и простой в использовании мастер-микс, содержащий все необходимые компоненты для реакции синтеза кДНК в одной пробирке. Оптимизирован для высокоэффективного синтеза кДНК для двухшаговой количественной ОТ-ПЦР (RT-qPCR) и обеспечивает воспроизводимый синтез кДНК при повышенных температурах (50–65°C) в течение 30 минут.

Преимущества Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix

Готовый мастер-микс сокращает количество этапов пипетирования и повышает согласованность результатов RT-qPCR.
Повышенная эффективность обратной транскрипции для широкого диапазона количеств входной РНК и целевых генов.
Высокая термостабильность позволяет проводить реакции обратной транскрипции в диапазоне температур 50–65°C.
Включен этап удаления геномной ДНК из образцов РНК (только для Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix с dsDNase).

Мастер-микс содержит обратную транскриптазу Maxima H Minus (RT) и ингибитор РНКаз RiboLock. Maxima H Minus RT – это усовершенствованный фермент, полученный из M-MuLV RT путем in vitro эволюции. Фермент отличается высокой термостабильностью, надежностью, процессивностью, повышенной скоростью синтеза кДНК и отсутствием активности РНКазы H. Рекомбинантный ингибитор РНКаз RiboLock эффективно защищает матрицу РНК от деградации РНКазами A, B и C при температурах до 55°C. Мастер-микс также содержит реакционный буфер, dNTP, олиго (dT)18 и случайные гексамерные праймеры. Отдельная пробирка с контрольной смесью No-RT также предоставляется для удобного отрицательного контроля RT.

Двухцепочечная ДНКаза (dsDNase), входящая в состав Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix с dsDNase, позволяет удалить геномную ДНК из образцов РНК за две минуты, не влияя на качество или количество РНК. Эта dsDNase также доступна отдельно (кат. № EN0771).

Дополнительная информация о компонентах реакции:

Контрольная смесь No RT содержит все компоненты Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, кроме RT. Наличие продукта ПЦР в контрольной реакции No RT указывает на то, что реакция загрязнена ДНК. Для дальнейшего повышения эффективности удаления геномной ДНК настоятельно рекомендуется инкубировать матричную РНК с dsDNase (кат. № EN0771).
Вода, не содержащая нуклеаз, предоставляется для подготовки реакции и разбавления ДНК образца. Отсутствие экзодезоксирибонуклеаз, рибонуклеаз и фосфатаз подтверждено соответствующими тестами качества.
Для дальнейшего повышения эффективности удаления геномной ДНК настоятельно рекомендуется инкубировать матричную РНК с включенной dsDNase (только для Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix с dsDNase).
dsDNase используется для быстрого и безопасного удаления контаминирующей геномной ДНК из образцов РНК. dsDNase легко инактивируется умеренной термической обработкой (55°C). Это позволяет значительно упростить рабочий процесс, объединив удаление геномной ДНК и синтез кДНК в одну процедуру в одной пробирке (только для Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix с dsDNase).

Только для исследовательских целей. Не для использования в диагностических процедурах.

Характеристики
Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

Для использования с (Приложение)	Real Time PCR (qPCR),RT-PCR
Скорость реакции	30 min.
Эффективность ПЦР в областях, богатых GC	Высокий

• Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix (1 x 800 μL) • Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix 'No RT' Control (1 x 200 μL) • Nuclease-free water (1 x 1.25 mL) Store at –5 to –30°C.

Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, 200 реакций

Готовый мастер-микс для быстрого и эффективного синтеза кДНК. Подходит для RT-qPCR.

Производитель: Thermo Fisher Scientific
Артикул: M1662
Размер: 1 штука
Наличие: Под заказ

Цена по запросу

0.00€ / 0₽
Без НДС: 0.00€ / 0₽

Количество

Включает:

Только набор

Количество реакций:

200 реакций

Варианты:

* — цена и наличие может измениться, уточняйте в запросе

Запрос коммерческого предложения сейчас — фиксирует текущую цену, тем самым устраняется риск увеличения цены от производителя Thermo Fisher Scientific
Срок поставки от 3 недель

Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix синтез кДНК обратная транскрипция ОТ-ПЦР RT-qPCR геномная ДНК dsDNase M1662

Поставка "Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, 200 реакций" c доcтавкой по России

Оптимальные условия поставки оригинальной продукции: "Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, 200 реакций", арт. M1662 из категории Наборы и мастер-миксы для синтеза кДНК от представителя Thermo Fisher Scientific в России.

Для уточнения цены позиции: "Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, 200 реакций" (p/n: M1662 ) или получения коммерческого предложения, воспользуйтесь формой ниже.

+7 (915) 099-44-06

partslab.solutions@gmail.com

Вопрос-ответ

Какие шаги предпринять при проведении синтеза первой цепи кДНК с использованием шаблона низкой чистоты (например, ингибиторы в образце РНК)?

Следовые количества реагентов, используемых в протоколах очистки РНК, могут оставаться в растворе и ингибировать синтез первой цепи, например, SDS, EDTA, соли гуанидина, фосфат, пирофосфат, полиамины, спермидин. Для удаления следовых загрязнений мы рекомендуем повторно осадить РНК этанолом и промыть осадок 75% этанолом, или повторно очистить РНК.

Почему в протоколе для Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix (кат. № M1681) отсутствует этап тепловой инактивации dsDNase?

Новый фермент dsDNase расщепляет двухцепочечную геномную ДНК. Однако он не оказывает никакого влияния на одноцепочечную кДНК или гибрид РНК-ДНК. Поэтому ферментную смесь для обратной транскрипции можно добавлять непосредственно к РНК, обработанной dsDNase.

Насколько важно качество РНК-матрицы для обратной транскрипции?

Чистота и целостность РНК необходимы для синтеза и количественного определения кДНК. Всегда оценивайте целостность РНК перед синтезом кДНК. Используйте свежеприготовленную РНК. Многократные циклы замораживания/оттаивания образца РНК и синтезированной кДНК не рекомендуются. Избегайте загрязнения РНКазой и утилизируйте РНК низкого качества.

Когда следует выбирать обычную обратную транскриптазу RevertAid RT или Maxima RT вместо RevertAid H Minus RT или Maxima H Minus RT?

Как правило, выгодно минимизировать активность РНКазы H при стремлении получить длинные транскрипты для клонирования кДНК. РНКаза H разрушает РНК из РНК-ДНК дуплексов, что может привести к укороченной кДНК во время обратной транскрипции длинной мРНК. Также рекомендуется использовать обратные транскриптазы без РНКазы H для не зависимого от матрицы добавления нуклеотидов C. В отличие от этого, обратные транскриптазы с собственной активностью РНКазы H часто предпочитают в приложениях qPCR.

Какой точностью обладают обратные транскриптазы RevertAid и Maxima?

Точность обратных транскриптаз RevertAid и Maxima такая же, как и у дикого типа M-MuLV RT, и составляет примерно 1 ошибку на 15 000-27 000 синтезированных нуклеотидов.

Обладают ли обратные транскриптазы Thermo Scientific (RevertAid RT, RevertAid H Minus RT, Maxima RT и Maxima H Minus RT) терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазной (TdT) активностью?

Все обратные транскриптазы Thermo Scientific (RevertAid RT, RevertAid H Minus RT, Maxima RT и Maxima H Minus RT) обладают внутренней TdT активностью, хотя и в разной степени, в зависимости от условий реакции. Для добавления шаблон-независимых C-нуклеотидов (как в экспериментах SMART и RACE), эта специфическая TdT активность может быть индуцирована Mn2+. Для этой цели мы рекомендуем использовать Maxima H Minus RT или RevertAid H Minus RT.