Модули Immuno Breakable, MaxiSorp, Белые

В следующем списке описаны геометрии лунок, доступные для иммунологических планшетов и модулей Nunc:
- Плоское дно (F): Обеспечивает максимальное пропускание света. Эти планшеты можно считывать на монохроматическом ридере.
- Круглое дно (U): Эта геометрия оптимизирует промывку и нанесение покрытий. Эти планшеты можно считывать с помощью двухволнового ридера.
- "C"-образное дно (C): Этот дизайн лунки представляет собой комбинацию плоского и круглого дна. По сути, это лунка с плоским дном и закругленными краями внизу. Эти планшеты также можно считывать с помощью монохроматического ридера, сочетая оптимальное считывание и промывку.
- StarWell: Эти лунки имеют модифицированную "C"-образную геометрию с восемью ребрами, стратегически расположенными на дне. Эта функция увеличивает площадь поверхности, позволяя большему количеству молекул иммобилизоваться, что сокращает время инкубации.

Мы протестировали и обнаружили, что пептид из 3 аминокислот (Pro, Leu, Gly) не может быть обнаружен при пассивной адсорбции на поверхности MaxiSorp. Однако этот пептид может быть обнаружен при ковалентной иммобилизации с использованием CovaLink NH Modules и CovaLink NH2 Modules и Plates. Используя ковалентную иммобилизацию малых пептидных остатков, вы обычно можете получить лучшую ориентацию молекулы и уменьшить проблемы с распознаванием пептида антителами из-за маскировки эпитопа. Мы обнаружили, что пептид из 7 аминокислот из антигена MHC класса II может быть обнаружен при адсорбции на поверхности MaxiSorp. Мы утверждаем, что предел обнаружения с использованием поверхности MaxiSorp составляет от 3 до 7 аминокислотных остатков.
Еще одно замечание заключается в том, что обнаружение зависит от ориентации пептида при иммобилизации. Если активный сайт инактивирован или скрыт на стороне, обращенной к твердой фазе, сигнал обнаружения не наблюдается.

Одноцепочечная ДНК может быть адсорбирована на поверхности MaxiSorp при использовании примерно 10 мкг одноцепочечной ДНК на мл PBS, pH 8.2, хотя стабильность неизвестна. По нашему опыту, одноцепочечная ДНК, иммобилизованная на поверхности MaxiSorp, настолько слабо связана, что ее можно удалить интенсивной промывкой.
Двухцепочечная ДНК не связывается с поверхностью MaxiSorp. Однако ДНК может быть ковалентно связана со стрипами Nunc NucleoLink.

Выбор планшетов или модулей будет зависеть от типа РИА, который вы планируете проводить, и от конкретных условий анализа. Nunc предлагает две различные поверхности для иммуноанализов: PolySorp и MaxiSorp.
- Поверхность MaxiSorp имеет высокий заряд и должна использоваться, если анализ требует количественного измерения белков (антител) или молекул с полярными группами.
- Поверхность PolySorp следует использовать, если анализ состоит из менее полярных молекул с гидрофобными характеристиками.

Молекулы связываются с нашими поверхностями PolySorp и MaxiSorp посредством пассивной адсорбции.
Используя IgG в качестве эталонной молекулы и зная, что это глобулярная молекула, теоретические расчеты показывают, что максимальная связывающая способность для белков составляет:
- Для поверхности MaxiSorp, в монослое: 650 нг/см^2
- Для поверхности PolySorp: 220 нг/см^2.

Обе эти поверхности идентичны. Единственное различие между ними заключается в том, что для сертифицированных планшетов репрезентативная выборка из каждой производственной партии проходит тест на связывающую способность. Этот тест представляет собой анализ, подобный ELISA, используемый в наших лабораториях контроля качества для обеспечения связывающих свойств.

Поверхности MaxiSorp, PolySorp и MiniSorp были разработаны для иммунологических анализов:
- Поверхность MaxiSorp – это модифицированная полистирольная поверхность с высоким зарядом и высоким сродством к молекулам с полярными или гидрофильными группами. Поверхность обладает высокой связывающей способностью для белков, включая глобулярные антитела в правильной ориентации. Таким образом, она обеспечивает очень высокую чувствительность в тестах с двойными антителами типа "сэндвич".
- Поверхность PolySorp более гидрофобна, чем поверхность MaxiSorp. Она обладает высоким сродством к молекулам с более гидрофобным характером. Эта поверхность особенно подходит для не-белковых антигенов, включая вирусные антигены.
- Поверхность MiniSorp – это полиэтиленовая поверхность с очень низким сродством к молекулам любого типа. Этот тип поверхности идеально подходит для иммунотехник в жидкой фазе.
- Поверхность MiniSorp доступна только в формате пробирок, в то время как поверхности MaxiSorp и PolySorp предлагаются как в формате 96-луночных планшетов, так и в формате модулей.

Чувствительность анализа сильно зависит от эффективного удаления неспецифически реагирующих молекул. Высокие фоновые показания и нестабильность покрытия можно минимизировать путем добавления этапа блокировки после первого покрытия. Избыток поверхности заполняется нейтральными молекулами.
Мы рекомендуем промывать три раза после каждого этапа покрытия, используя раствор 0,15 M фосфатного буфера (pH 7,2) с 0,2 M NaCl и 0,05% Tween 20.
Для блокировки мы рекомендуем использовать 0,5% BSA, 1% казеин или 1% желатин в 0,15 M фосфатном буфере (pH 8,2) или карбонатном буфере (pH 9,6).

В следующем списке представлено краткое описание особенностей продукции Nunc и ее конкретного применения:
- Nunc-Immuno Plates, поверхность MaxiSorp – Эти планшеты предназначены для твердофазного иммуноанализа и имеют полистирольную поверхность с высоким сродством к полярным группам и гидрофильным молекулам. Эти 96-луночные планшеты доступны с плоским (F), круглым (U) или (C) дном лунок.
- Nunc-Immuno Plates, поверхность PolySorp – Эти планшеты имеют полистирольную поверхность, которая адсорбирует менее полярные молекулы по сравнению с поверхностью MaxiSorp и обладает высоким сродством к гидрофобным группам. Эти 96-луночные планшеты доступны с плоским (F), круглым (U) или (C) дном лунок.
- Nunc-Immuno Modules – Эти модули предназначены для твердофазного иммуноанализа. Модули доступны в форматах 8-, 12- или 16-лунок с (F), (U) и (C) дном лунок, а также 8-луночные BreakApart с (C) дном лунок. Эти различные форматы позволяют выбрать стиль, подходящий для вашего дизайна анализа.

Модули BreakApart и LockWell можно использовать для радиоиммунологических анализов.
- Nunc StarWell Immuno Breakable Modules – 8-луночные модули имеют восемь ребер на внутренней стенке лунок с (C) дном. Эта конструкция увеличивает площадь поверхности на 50%. Увеличение площади поверхности позволяет иммобилизовать больше молекул, увеличивая сигнал анализа. Конфигурация ребер обеспечивает более короткое расстояние диффузии до поверхности, сокращая время инкубации.
- LockWell Immuno Breakable Modules – Каждая плашка состоит из 1 x 8 отламываемых стрипов. Эти стрипы собраны в специальную рамку, которая фиксирует каждую лунку на месте с помощью пружинного замка. Эта конструкция пружинного замка ориентирует каждую лунку на одном горизонтальном уровне, обеспечивая равномерную промывку и считывание. Модули LockWell доступны с круглым (U), (C) или StarWell дном лунок.
- Планшеты и модули с (CovaLink) ковалентно связывающими поверхностями: Эти планшеты можно использовать для связывания белков, пептидов, ДНК или углеводов. Ковалентное связывание происходит через вторичную аминную группу. Это обеспечивает определенную ориентацию и обеспечивает улучшенную стабильность по сравнению с пассивной адсорбцией из-за химической связи между молекулами. Связывание молекул на поверхностях PolySorp и MaxiSorp достигается пассивной адсорбцией. CovaLink — это поверхность, привитая вторичными аминогруппами (<NH), которые служат мостом для ковалентного связывания. Ковалентное связывание может иммобилизовать небольшие молекулы, такие как биотин или пептиды, которые в противном случае могут слабо связываться путем физической адсорбции, и облегчать распознавание молекулой обнаружения.
- Nunc FluoroNunc/LumiNunc 96-Well Plates: Эти планшеты оптимизированы для IFMA (иммунофлуориметрические анализы) или FIA (флуориметрические иммуноанализы). Прозрачные полистирольные планшеты обеспечивают низкий фоновый уровень флуоресценции и оптимальны там, где используется система считывания на просвет. Белые планшеты/модули обеспечивают максимальное отражение флуоресцентного сигнала, сохраняя при этом низкий фон. Белые планшеты/модули часто используются для эпифлуоресцентного считывания. Черные модули снижают фоновую флуоресценцию и сводят к минимуму рассеяние света, которое часто встречается при эпифлуоресценции.